|
|
Vývoj čipu pro separaci biologických agens pomocí izoelektrické fokusace v rozbíhavém toku
Duša, Filip ; Šalplachta, Jiří ; Horká, Marie ; Lunerová, K. ; Rosenbergová, K. ; Kubíček, O.
Izoelektrická fokusace (IEF) je účinnou metodou schopnou separovat jednotlivé druhy bakterií. IEF v rozbíhavém toku (DF-IEF) umožnuje kontinuálně separovat větší objem vzorku a separované analyty jímat do frakcí k pozdější analýze. Těchto vlastností bylo využito při vývoji DF-IEF čipu pro separaci biologických agens (B-agens) inaktivovaných parami H2O2. Čip byl navržen pro separaci ve vertikální poloze, která zabránila sedimentaci běžně se vyskytující u bakteriálních vzorků a znemožňující účinnou separaci. Po optimalizaci separační metody za využití barevných markerů izoelektrického bodu byla provedena separace čtyř druhů B-agens. Všechny získané frakce byly dále analyzovány pomocí hmotnostní spektrometrie s matricí asistovanou laserovou desorpcí/ionizací (MALDI-MS). Hmotnostní spektra prokázala účinnost vyvinutého DF-IEF čipu pro separaci inaktivovaných b-agens.
|
|
| |
|
|
Studium transferinu jako markeru dědičných poruch glykosylace
Ondrušková, Nina ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Befekadu, Asfaw (oponent)
Dědičné poruchy glykosylace proteinů (CDG) představují rozsáhlou skupinu závažných metabolických onemocnění, která jsou způsobena poruchou v biosyntéze glykoproteinů. Pro "screeningové" vyšetření poruch N-glykosylace se využívá analýza sialovaných iso- forem sérového transferinu (Tf) pomocí isoelektrické fokusace (IEF). V případě nemoci dochází ke změnám v zastoupení jednotlivých isoforem Tf, rozlišujeme patologický pro- fil typu I (snížený tetra-, zvýšený di- a asialotransferin) a typu II (má navíc zvýšený tri- a monosialotransferin). Cílem diplomové práce bylo: 1) stanovit referenční rozmezí pro spektrum sialovaných forem Tf separovaných pomocí IEF a 2) provést u tří paci- entů (P1-P3) s klinickým podezřením na CDG biochemickou a molekulárně genetickou analýzu. Materiálem byly vzorky sér a genomové DNA od tří pacientů s klinickým po- dezřením na CDG a rodinných příslušníků od P1. Kontrolní soubor tvořilo 99 vzorků sér od zdravých jedinců ve věku 2-42 let. Sérum bylo analyzováno pomocí IEF s násled- nou imunofixací, SDS-PAGE a Western blotem s využitím specifické protilátky proti lidskému Tf (Dako). Profily Tf byly kvantifikovány pomocí programu AlphaEaseFC (Alpha Innotech). Data byla zpracována pomocí programu STATISTICA 9.0 (Stat- Soft). Analýza genů TF a PMM2 byla provedena pomocí cyklického...
|
|
|
Stanovení a porovnání elektromigračních vlastností markerů pro izoelektrickou fokusaci
Lorinčíková, Kateřina ; Gaš, Bohuslav (vedoucí práce) ; Kašička, Václav (oponent)
Byly proměřeny závislosti elektroforetické mobility na pH pro 14 pI markerů využívaných pro izoelektrickou fokusaci připravených skupinou Šlaise, které jsou založené na substitucích na nitrofenolovém jádře, a pro 5 pI markerů připravených Shimurou, které mají strukturu oligopeptidů. Pomocí programu AnglerFish byly z těchto závislostí získány termodynamické disociační konstanty a limitní elektroforetické pohyblivosti daných látek. Ze získaných hodnot byly následně vypočítány hodnoty pI příslušných markerů. Provedlo se srovnání získaných hodnot pI s těmi, jež jsou uváděny v literatuře, avšak byly stanoveny jinými analytickými metodami. Klíčová slova kapilární zónová elektroforéza, izoelektrická fokusace, pI markery, izoelektrický bod, termodynamická disociační konstanta, limitní iontová pohyblivost
|
|
| |
|
| |
|
|
Studium transferinu jako markeru dědičných poruch glykosylace
Ondrušková, Nina ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Befekadu, Asfaw (oponent)
Dědičné poruchy glykosylace proteinů (CDG) představují rozsáhlou skupinu závažných metabolických onemocnění, která jsou způsobena poruchou v biosyntéze glykoproteinů. Pro "screeningové" vyšetření poruch N-glykosylace se využívá analýza sialovaných iso- forem sérového transferinu (Tf) pomocí isoelektrické fokusace (IEF). V případě nemoci dochází ke změnám v zastoupení jednotlivých isoforem Tf, rozlišujeme patologický pro- fil typu I (snížený tetra-, zvýšený di- a asialotransferin) a typu II (má navíc zvýšený tri- a monosialotransferin). Cílem diplomové práce bylo: 1) stanovit referenční rozmezí pro spektrum sialovaných forem Tf separovaných pomocí IEF a 2) provést u tří paci- entů (P1-P3) s klinickým podezřením na CDG biochemickou a molekulárně genetickou analýzu. Materiálem byly vzorky sér a genomové DNA od tří pacientů s klinickým po- dezřením na CDG a rodinných příslušníků od P1. Kontrolní soubor tvořilo 99 vzorků sér od zdravých jedinců ve věku 2-42 let. Sérum bylo analyzováno pomocí IEF s násled- nou imunofixací, SDS-PAGE a Western blotem s využitím specifické protilátky proti lidskému Tf (Dako). Profily Tf byly kvantifikovány pomocí programu AlphaEaseFC (Alpha Innotech). Data byla zpracována pomocí programu STATISTICA 9.0 (Stat- Soft). Analýza genů TF a PMM2 byla provedena pomocí cyklického...
|
|
| |
|
| |
|
|
New isoelectric focusing power supply based on features of voltage multiplier
Duša, Filip ; Šlais, Karel
Present electrophoretic separation methods rely on sophisticated high-voltage power supplies capable of programing a voltage / current time course during an analysis. In this paper we suggest design of a simple highvoltage power supply for isoelectric focusing composed from affordable and commonly available electrical parts. It is based on features of the voltage multiplier invented by Cockcroft and Walton. Electrical characteristics of the power supply enabled power load controlled isoelectric focusing analysis thus eliminating need for programing voltage time course and reducing analysis total time.
|
host ::
RSS.